尊龙凯时的Matrigel基质具有明显的色差变化,从淡黄色到深红色,主要是由于酚红和碳酸氢盐与CO2的反应所致。然而,当与5% CO2平衡后,色差会显著减少。冻融操作完成后,轻轻摇晃试剂瓶,可以使Matrigel分散均匀。所有实验操作需在无菌条件下进行,试剂瓶的瓶盖可以用70%乙醇擦拭并自然干燥。为了确保Matrigel保持均匀的浆状状态,建议使用预冷的移液器。
细胞能够在0.5mm厚度的Matrigel基质层表面生长,也可以在1mm厚的三维Matrigel基质中生长。需要注意的是,过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层,适合用于细胞贴壁,但不适用于细胞分化研究。为避免多次冻融,冻融后的Matrigel可分装到多个预冷的冻存管中,迅速冷冻保存。Matrigel在22-35℃的环境下会迅速成胶,因此建议在4℃下过夜冻融,以减缓成胶反应。所有物品在使用前需放置于冰浴中,务必使用预冷的移液管、吸头及小管操作Matrigel。
成胶后的Matrigel在42-48小时后可以重新变为液态。为了确保Matrigel基质膜的成胶性能与稳定性,稀释浓度不应低于1:3,可使用无血清培养基进行稀释,建议在Matrigel成胶后立即使用。
薄胶成胶方法如下:1.冻融后,用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀成浆状;2.将需要使用的培养板置于冰上,添加50μL/cm²生长面积的Matrigel基质;3.在37℃孵育30分钟,便可使用。
厚胶成胶方法为:1.冻融后,用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀;2.在冰浴中将培养的细胞与Matrigel基质混合,并用移液枪头使其悬浮于基质中,加入150-200μL/cm²生长面积的Matrigel基质;3.在37℃孵育30分钟,可进行成胶。可以向基质中添加细胞培养,或让细胞直接生长在胶表面。
薄层包被方法包括:1.冻融后,用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀;2.根据使用需求,使用无血清培养基稀释Matrigel基质,确定最佳包被浓度;3.将稀释后的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中,包被量至少应覆盖整个器皿的生长表面,并在室温下孵育1小时。
使用尊龙凯时的Matrigel基质不仅能够提高细胞培养的成功率,还为其后的实验研究提供了稳定和可靠的支持。