关键词：肝微粒体，药物-药物相互作用（DDI），细胞色素P450酶（CYP450），时间依赖性抑制（TDI）

药物-药物相互作用（DDI）是临床中导致严重不良反应乃至死亡的重要原因之一，因此对DDI的可能性、严重性及其影响进行科学评估显得尤为必要。细胞色素P450酶（CYP450）是体内重要的药物代谢酶，其在评估药物相互作用时，主要通过代谢表型研究、酶诱导作用评估及酶抑制作用评估来进行分析。其中，药物对CYP450酶的抑制可分为可逆性抑制和时间依赖性抑制（TDI）。相较于可逆性抑制，TDI带来更为严重的用药安全隐患，因而逐渐受到监管机构及药物研发者的重视。

CYP酶介导的时间依赖性抑制简介

CYP酶介导的酶抑制是指某些化合物抑制部分CYP450代谢酶的活性，导致联合用药时出现代谢减慢、清除率降低及药物暴露量增加等现象，从而引发安全隐患。根据抑制机制的不同，抑制作用分为可逆性抑制和时间依赖性抑制。时间依赖性抑制通常是指候选药物的代谢产物通过共价键与酶结合，导致其不可逆性失活，抑制效应在去除抑制剂后并不会立即消失，而是表现出时间依赖特征。TDI的发生不仅对患者健康构成威胁，也对制药企业提出了挑战，因此逐年受到重视。

相关指导原则《药物相互作用研究技术指导原则（试行）》以及国际会议（ICH）《M12：药物相互作用》均明确要求对在研药物对七种常规CYP同工酶的可逆性与时间依赖性抑制进行体外评估。

时间依赖性抑制体外试验评估

目前，通常采用人肝微粒体进行时间依赖性抑制评估，其常用的方法包括Single-point法、IC50位移法（IC50 shift）和Kinact/Ki法。其中，IC50位移法是较为普遍采用的评估方法，适用于高通量筛选和早期评估。

Single-point法

试验设计：使用单一或两个试验浓度（通常为1μM/10μM），结合一个探针底物浓度，并进行±NADPH预孵育。适用于粗略评估。

评价参数：相对剩余活性计算。若相对剩余活性<80%，提示存在潜在的TDI风险。

IC50位移法

试验设计：设置系列试验浓度，结合一个探针底物浓度，并于±NADPH预孵育30分钟后测定IC50值。

评价参数：IC50位移=IC50（-NADPH）/IC50（+NADPH）。若IC50位移≥15，提示在研药物存在TDI。

Kinact/Ki法

试验设计：多重试验浓度与探针底物浓度，并对±NADPH进行多时间点的预孵育。

评价参数：Kinact/Ki并结合临床PK数据计算R2值评价临床相关性。

IPHASE的时间依赖性抑制试验数据分析

IPHASE作为体外研究生物试剂的领导者，运用IC50位移法验证不同抑制剂对人肝微粒体CYP3A4的时间依赖性抑制作用。通过已知底物睾酮的转化，利用液相-串联质谱（LC-MS/MS）检测6β-羟基睾酮的生成量进一步用于计算IC50值。

抑制剂分析

1. 无TDI作用的抑制剂：例如，NADPH（+）组的IC50为691μM，NADPH（-）组IC50为876μM，IC50位移倍数<15，表明无TDI作用。

2. NADPH依赖的TDI：如在发现NADPH（+）组的IC50曲线显著左移，IC50位移倍数>15，表明存在NADPH依赖的TDI作用。

其他案例分析中，观察不同的抑制剂展现出不同的依赖性与代谢特征，通过评估可以得到更全面的药物安全数据。

IPHASE相关产品

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