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尊龙凯时:选择适合的DNA/RNA定量仪器——分光光度计还是荧光计?

发布时间:2025-02-21   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时提供的准确分子分析依赖于精确的样品定量。本指南旨在帮助研究人员在选择紫外-可见光分光光度法或荧光定量法进行核酸质量控制时做出明智的决策。在生物医疗研究中,样品定量是评估核酸和蛋白质提取物是否适合后续实验(如分子克隆、高通量测序或PCR)的关键步骤。核酸分析主要利用两种定量技术:紫外-可见光分光光度法和荧光定量法。然而,研究人员在两者之间的选择可能会遇到一定困难。本指南将简要介绍这两种技术的功能与应用,帮助您选择最合适的工具。

尊龙凯时:选择适合的DNA/RNA定量仪器——分光光度计还是荧光计?

分光光度计长期以来在核酸定量中被广泛应用,提供多种适用性强的方法。该操作基于光吸收的基本原理,分光光度计能够测量样品在特定波长下的光吸收量,以确定吸光度,吸光度与吸收物质的浓度成正比。这一原理根据比尔-朗伯法则,为定量分析溶液中物质浓度提供了有效的工具。在核酸定量方面,分光光度计特别擅长评估核酸纯度,因其在260nm波长处显现特征吸收峰,成为常用的分析参考。然而,需要注意的是,分光光度法缺乏对核酸的选择性,因为DNA和RNA均在260nm处吸收光。这表明此方法无法区分纯DNA和被RNA污染的样品,或任何在相同波长下吸收的其他物质。

作为一种互补策略,荧光定量法在核酸定量方面提供更高的灵敏度和特异性。该技术使用特定的荧光染料,这些染料能特异性与核酸分子结合,在外部光源的激发下发出特定波长的光。通过测量这些发射光(荧光)的强度,即使在极低浓度水平下,也能够准确定量核酸浓度。与分光光度计相比,荧光计具有多项优势。首先,它能够区分不同类型的核酸,如单链DNA(ssDNA)和双链DNA(dsDNA),在样品成分十分重要的应用中尤其珍贵。此外,荧光计可以探测皮克(pg)级别的核酸浓度,远超分光光度计的纳克(ng)范围。

选择合适的仪器时,需考虑样品特性。在核酸定量中,选择分光光度计或荧光计最终取决于样品特性和后续实验的具体需求。对于纳克级范围内的纯均质核酸样品,或对核酸类型没有严格区分要求的情况下,分光光度计提供简单且经济的解决方案。相反,荧光计更适合用于低浓度样品(皮克级)、异质分析(成分复杂)以及需要区分不同核酸类型的实验。尽管荧光计在灵敏度和特异性方面表现优异,但其使用荧光染料的步骤较为复杂且耗时。此外,荧光计的前期相关设备采购成本通常高于分光光度计。

在选择标准的分光光度计与荧光计时,可以考虑以下因素:样品浓度(ng与pg)、快速样品测量、选择性(区分DNA和RNA)、后续分析的复杂性和成本(试剂耗材)等。虽然紫外-可见光分光光度法与荧光定量法差别显著,尊龙凯时的EzDrop分光光度计和EzCube荧光计提供互补但截然不同的样品定量方法。

EzDrop分光光度计能够基于吸光度快速、准确地对纯化样品进行定量,包括核酸和蛋白质。其检测范围广泛,从dsDNA浓度2到20,000ng/µL,蛋白质浓度(如BSA)从006到600mg/mL。而EzCube荧光计则擅长识别特定类型的核酸,包括ssDNA、dsDNA和RNA,结合针对不同样品类型的特定配对试剂,其对应的dsDNA低检测限可达dsDNA001ng/µL(10pg/µL)、ssDNA为005ng/µL(50pg/µL),RNA则为025ng/µL(250pg/µL)。此外,EzCube荧光计配备三个LED光源,能够激发多种荧光试剂,因此适用于NGS、qPCR、克隆及转染等特定应用。

最后,尊龙凯时的EzDrop分光光度计和EzCube荧光计提供互补的定量方法。EzDrop分光光度计可以进行快速、准确的吸光度定量,而EzCube荧光计则专注于低检测限内的特定核酸类型识别。通过善用这两者的互补优势,研究人员能够有效地定量各种样品并识别具有不同特性的样品,从而促进后续实验的成功。