本文将介绍尊龙凯时品牌的哺乳动物蛋白提取试剂盒的组成、保存条件及操作步骤，以帮助研究者高效提取所需蛋白质。

试剂盒组成

尊龙凯时哺乳动物蛋白提取试剂盒包含以下成分：

• 5X Buffer 10ml
• 5X NaCl 10ml
• 5X SDS 10ml
• 5X DOC 10ml
• 5X NP-40 10ml
• 20X PBS 10ml
• Protease inhibitor cocktail 0.5ml

保存条件

该试剂盒可在常温下存放，唯独Protease inhibitor cocktail需存于-20°C，以确保其活性。其保质期为24个月。

提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1的比例（v/v）配制细胞裂解缓冲液。每提取106至107个细胞或5至20mg的组织应使用1ml的细胞裂解缓冲液，并在使用前加入10μl的Protease inhibitor cocktail。

2. 洗涤细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：去除培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞两次。然后加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），将细胞置于冰袋中，在摇床上孵育30分钟，期间阶段性重悬，上述过程结束后收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：在700xg离心5分钟，弃去上清液，用PBS重悬并洗涤两次，随后在4°C下离心并去除上清。最后将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中，浸入冰袋中，摇床孵育30分钟。

c. 对于组织：将组织切割成小块，用PBS冲洗两次，加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），并将样品转移至预冷的微量匀浆器中，在冰上均匀化组织30至50次，确保均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。

3. 离心步骤

在4°C条件下，使用12,000xg离心10分钟，以沉淀细胞碎片；或者使用100,000xg的高速离心处理45分钟，以准备纯化的蛋白质溶液。

4. 移液及保存蛋白质溶液

将含蛋白质的上清液转移至冷冻管中。在冰上可立即使用或将其保存在-70°C中，以延长保存时间。

选择尊龙凯时的蛋白提取试剂盒，倾力助您在生物医学研究中取得优异成果。