本试剂盒仅供科学研究使用,严禁用于医学诊断。尊龙凯时推出的Twist转录因子(TWIST)ELISA试剂盒使用说明书阐述了其检测原理。该试剂盒采用双抗体一步夹心法的酶联免疫吸附试验(ELISA)进行分析。首先,将样品、标准品以及HRP标记的检测抗体依次加入到预先涂覆了adropin(AD)抗体的微孔中,经过温育和彻底洗涤后,使用TMB底物进行显色反应。TMB在过氧化物酶的催化下,会转化为蓝色,随后在酸性条件下变化为最终黄色。颜色的深浅与样品中adropin(AD)的浓度呈正相关。
通过酶标仪在450nm波长下测量吸光度(OD值),从而计算样品浓度。以下为样品的收集、处理及保存方法:
- 血清: 使用不含热原和内毒素的试管,操作时避免任何细胞刺激。收集血液后,3000转离心10分钟,以迅速小心地分离血清和红细胞。
- 血浆: 采用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂,3000转离心30分钟,取上清液。
- 细胞上清液: 3000转离心10分钟,以去除颗粒和聚合物。
- 组织匀浆: 将组织与适量生理盐水混合并捣碎,然后3000转离心10分钟以获取上清液。
- 保存: 如果样本收集后未能及时检测,应分装为一次用量并冻存于-20℃,避免反复冻融。在室温下解冻前确保样品均匀充分地解冻。
使用注意事项: 试剂盒的组成需遵循说明书要求,标准品(S0-S5)浓度依次为:0、25、50、100、200、400pg/mL。
试剂的准备: 20×洗涤缓冲液的稀释需用蒸馏水按1:20的比例,1份的20×洗涤缓冲液需加19份蒸馏水。
洗板方法: 在实践过程中,应确保遵循标准操作步骤。通过在Excel中绘制标准曲线,以标准品浓度作为横坐标,对应OD值作为纵坐标,绘制线性回归曲线,依据曲线方程可计算各样本的浓度值。
免责声明: 尊龙凯时提供的试剂盒性能因实验条件的不同可能会有所变化,请务必在使用时遵循说明书中的指导。