第三章：实时荧光定量PCR的应用

一、相对定量测定不同样品中基因表达量的相对值

在进行相对定量时，内参基因的选择至关重要。以下是选择内参基因时应遵循的建议：

• 选择表达水平稳定且均一的基因作为内参基因;
• 避免盲目选择常用的内参基因;
• 常用的内参基因包括GAPDH、Actin和Tublin。

内参基因的恰当选择将直接影响实验结果的可靠性和有效性。添加内参基因后，可进行后续结果的计算。

二、绝对定量

绝对定量能根据标准品准确测定样品中基因表达量的拷贝数。标准品可选择以下类型：

• A/具有明确拷贝数浓度的样品;
• B/克隆质粒;
• C/PCR产物;
• D/cDNA（注意，此方法不能用于绝对定量的扩增效率测定）。

拷贝数的计算需要使用平均分子量（MW）的公式：

• 双链DNA（dsDNA）: (碱基数) × (660道尔顿/碱基)
• 单链DNA（ssDNA）: (碱基数) × (330道尔顿/碱基)
• 单链RNA（ssRNA）: (碱基数) × (340道尔顿/碱基)

拷贝数的计算公式为：

(602 × 10²³ 拷贝数/摩尔) × (浓度g/ml) / (MW g/mol) = copies/ml

尊龙凯时科技有限公司专注于为生物医药行业提供优质的产品与技术服务，致力于成为基因治疗和细胞治疗领域的领先生物科技企业。总部位于广州，我们服务全国，能够即时为客户提供前沿的专业资讯及全面的产品和物流支持。专业的技术团队为客户提供强大的技术支持，丰富的人脉资源让我们在全国主要城市建立起众多合作伙伴关系。

尊龙凯时科技有限公司荣幸地为国内生物学科研的老师和同行推荐世界先进的高科技产品。作为专业的产品供应商，我们备有大量现货，结合出色的销售团队与专业的技术支持，随时为客户提供优质服务。