尊龙凯时的细胞培养条件要素包括：气相配比为95%空气与5%二氧化碳；培养温度保持在37℃。推荐使用DMEM培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S），为贴壁生长的A-673细胞提供理想环境。A-673细胞是来源于一位15岁女性的横纹肌肉瘤，能在软琼脂中形成克隆，并在免疫缺陷小鼠中表现出肿瘤形成能力。其细胞特征包括四个以上的标志性染色体，以及额外的F染色体和两个异常的B染色体。

细胞传代的建议为1:2，配合2天换液的步骤。为了确保细胞的良好存活状态，收到时应进行及时处理。处理完后，尽量将完整培养液填满并密封瓶口，确保运输过程中细胞状态的稳定。当您收到细胞时，请用75%乙醇对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃和5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以便细胞状态稳定，再进行后续处理。

在显微镜下观察细胞生长情况，并保存不同倍数的照片（建议40x, 100x, 和200x各一张）。前三天的照片非常重要，若未提供，将默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

尊龙凯时推荐的细胞传代步骤如下：

1. 当细胞覆盖面积未超过80%时，收集培养瓶内的完全培养液至离心管中，保留5ml进行培养；若细胞密度超过80%，可直接进行传代。

2. 在传代步骤中，首先弃去培养上清，并用不含钙镁的PBS润洗细胞1-2次。接着，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液进培养瓶中，放入37℃培养箱内消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞开始变圆并脱落，迅速轻击培养瓶后添加超过5ml的完全培养基以结束消化。

3. 然后轻轻吹打细胞使其完全脱落并吸出，转移至15ml离心管中，于1000RPM下离心5分钟，去除上清，加1-2ml完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶，添加新的完全培养基至5-8ml每瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤

对于悬浮细胞的传代，推荐使用半换液法和离心换液法。半换液法中，轻轻吸去3ml培养基后添加同量的新完全培养基；若培养基变色慢，可直接添加约500ul的FBS。一般情况下，经过3次半换液后可进行一次离心传代以去除死细胞。

在离心换液法中，将细胞悬液收集至离心管中，以1000rpm离心5分钟，去除上清，加入1-2ml培养液重悬，再按1:2的比例分至新T25瓶中，补充6-8ml新的完全培养基。

细胞冻存与复苏

对于细胞的冻存，需要在细胞覆盖到80%时，如弃去培养液并用PBS清洗，随后使用胰蛋白酶消化，终止消化后收集至离心管中，可加入1ml的无血清冻存液，混匀后移至冻存管中。在-80℃冰箱中冷冻24小时后可转入液氮罐保存。

复苏时，从液氮中取出细胞管，快速放入37℃水浴中解冻，消毒后转移至含5ml完全培养基的离心管，离心后重悬，接种至T25瓶中，并在37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。第二天更换为新鲜培养基继续培养。

注意：在运输过程中某些细胞可能会脱落，这是正常现象。如有大量脱落，请收集培养液并离心处理，然后按前述步骤进行重悬和传代。