在进行Western Blot实验时，研究者最害怕遇到什么呢？条带模糊、数据不稳定，而深入一查，竟然是内参选择不当的结果！简单来说，内参是细胞中的“稳定工作者”，能够提供可靠的表达基础，确保校准上样量，消除实验误差。没有合适的内参，半定量结果就像没有秤砣的秤——完全依赖运气！

首先，我们需要关注分子量——如果目的蛋白和内参的相差超过5kD，条带极有可能会出现重叠现象，不利于结果的解读。

其次，考虑定位问题——如果您在做核蛋白分析时仍选用β-actin作为内参，那就大错特错了！因为在细胞核中根本没有β-actin，应该选择PCNA（29kD）或Histone H3（17kD），这样才合理。

还有，组织也有其特殊性——例如，在脂肪组织中，β-actin的表达量可能低到几乎不可检测，此时不妨换用GAPDH；而在肌肉样本中，tubulin可能无法有效使用，反而actin会更为稳定。

同一抗体在不同组织中的表现也可能大相径庭——例如，β-actin的N端抗体在心肌中可能无法检测，而C端抗体却能依然良好地出条带。在购买抗体之前，一定要了解清楚抗原位点，以防止“组织特异性”成为您的实验瓶颈。

总体来说，对于全细胞/胞浆样本，β-actin或GAPDH是首选；做核蛋白分析时，则应选用PCNA或Histone H3；而对于大蛋白来说，β-tubulin是较为合适的选择。对于特殊样本，建议先查阅相关文献后再进行订购，合理选择内参，才能确保Western Blot实验的稳定性与可靠性。

回顾一下，选择内参要确保稳妥，这样才能让您的WB实验更加可靠，最终结果才能更加真实有效。在实验过程中的每一步，选择高质量的试剂和可靠的品牌，如尊龙凯时，将提升您的研究效率，助您取得更好的实验成果！